Diagnóstico molecular de Ehrlichia canis em cães de Goiânia, Brasil / Molecular diagnostics of Ehrlichia canis in dogs from Goiânia state of Goiás, Brazil

Ehrlichia canis é um parasito bacteriano intracelular obrigatório, agente da Erliquiose Monocítica Canina. O método de diagnóstico laboratorial de rotina é realizado pela demonstração microscópica direta das inclusões intraleucocitárias. Mais recentemente a reação em cadeia da polimerase (PCR)foi introduzida como um método para aumentar a sensibilidade e a especificidade do diagnóstico. O objetivo deste trabalho foi pesquisar a presença de Ehrlichia em cães na cidade de Goiânia, Goiás, por métodos de diagnóstico molecular. Para o estudo, foram obtidas 40 amostras de sanguede cães sintomáticos atendidos no Hospital Veterinário da Universidade Federal de Goiás. Todas as amostras, após a extração de DNA, foram testadas pela PCR empregando-se oligonucleotídeos gênero-específicos e, posteriormente, espécie-específicos para o gene 16S rRNA. Em seguida, foirealizada a purificação do produto de PCR espécie-específico para a realização de sequenciamento. Destas, 17 mostraram-se PCR positivas tanto nas reações para gênero quanto para a espécie E. canis. Os produtos de PCR foram sequenciados e as sequências com melhor qualidade (n igual a 5)foram escolhidas para estudos subsequentes. A análise de similaridade pelo BLASTn demonstroucorrespondência com a espécie Ehrlichia canis. Graças à utilização do programa Mega4 foi possível verificar que as amostras de E. canis provenientes de cães da cidade de Goiânia apresentam elevado grau de similaridade molecular com os isolados de referência para a mesma subespécie de outras regiões do Brasil e do mundo. Amostras de E. canis de cães avaliados neste estudo formam grupo filogenético bem definido, juntamente com amostras de referência de E. canis de diferentes regiõesgeográficas. As sequências obtidas foram depositadas no GenBank como sequências parciais do gene 16S rRNA de E. canis, procedentes de Goiânia.

Ehrlichia canis (Jaboticabal strain) induces the expression of TNF-α in leukocytes and splenocytes of experimentally infected dogs / Amostra Ehrlichia canis (Jaboticabal) induz a expressão de TNF-α em leucócitos e esplenócitos de cães experimentalmente infectados

Canine ehrlichiosis is caused by the bacterium Ehrlichia canis and is characterized by a systemic febrile disease of unknown pathogenesis. This study evaluated the expression of cytokines TNF-α, IL-10, IFN-γ, in splenic cells and blood leukocytes during the acute phase of ehrlichiosis and after treatment with doxycycline hyclate in dogs experimentally infected with the E. canis Jaboticabal strain. The study results showed a significant expression of TNF-α 18 days post-inoculation, reducing by approximately 70 percent after treatment. There was a unique peak of expression of IL-10 and IFN-γ 18 and 30 days post-inoculation, respectively. This study suggests that TNF-α plays a role in the pathogenesis of the acute phase of canine ehrlichiosis and that treatment with doxycycline hyclate reduces the systemic effects of this cytokine, possibly by reducing or eliminating parasitemia.

A erliquiose canina é causada pela bactéria Ehrlichia canis, que desencadeia no hospedeiro uma doença febril e sistêmica, de patogênese pouco conhecida. O presente estudo avaliou a expressão das citocinas TNF-α, IL-10, IFN-γ, em células esplênicas e em leucócitos sanguíneos, durante a fase aguda da erliquiose e após o tratamento com hiclato de doxiciclina, em cães experimentalmente infectados com a amostra E. canis Jaboticabal. Os resultados mostraram expressão significativa de TNF-α 18 dias após a inoculação, reduzindo aproximadante 70 por cento após o tratamento. Houve um único pico de expressão de IL-10 e de IFN-γ entre 18 e 30 dias após a inoculação, respectivamente. Este estudo sugere que o TNF-α participa da patogenia da fase aguda da erliquiose canina, e que o tratamento com hiclato de doxiciclina reduz os efeitos sistêmicos dessa citocina, possivelmente por reduzir ou eliminar a parasitemia.

Sequence and phylogenetic analysis of the gp200 protein of Ehrlichia canis from dogs in Taiwan

Ehrlichia (E.) canis is a Gram-negative obligate intracellular bacterium responsible for canine monocytic ehrlichiosis. Currently, the genetic diversity of E. canis strains worldwide is poorly defined. In the present study, sequence analysis of the nearly full-length 16S rDNA (1,620 bp) and the complete coding region (4,269 bp) of the gp200 gene, which encodes the largest major immunoreactive protein in E. canis, from 17 Taiwanese samples was conducted. The resultant 16S rDNA sequences were found to be identical to each other and have very high homology (99.4~100%) with previously reported E. canis sequences. Additionally, phylogenetic analysis of gp200 demonstrated that the E. canis Taiwanese genotype was genetically distinct from other reported isolates obtained from the United States, Brazil, and Israel, and that it formed a separate clade. Remarkable variations unique to the Taiwanese genotype were found throughout the deduced amino acid sequence of gp200, including 15 substitutions occurring in two of five known species-specific epitopes. The gp200 amino acid sequences of the Taiwanese genotype bore 94.4~94.6 identities with those of the isolates from the United States and Brazil, and 93.7% homology with that of the Israeli isolate. Taken together, these results suggest that the Taiwanese genotype represents a novel strain of E. canis that has not yet been characterized.